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免疫血清也稱抗血清，就是含有抗體的血清制劑。種類很多，廣泛的應(yīng)用于醫(yī)學、生物學的各個學科，特別在免疫測定和免疫病理的診斷中更是常用。
免疫血清的實驗原理：
具有免疫原性的抗原可刺激機體相應(yīng)B細胞增殖、分化形成漿細胞并分泌特異性抗體。由于抗原分子表面的不同決定簇為不同特異性的B細胞克隆所識別，因此由某一抗原刺激機體后產(chǎn)生的抗體，實際上為針對該抗原分子表面不同決定簇的抗體混合物（即多克隆抗體）。另外，抗體的產(chǎn)生具有回憶應(yīng)答的規(guī)律性，現(xiàn)為初次免疫注射與再次免疫注射后的抗體應(yīng)答特點截然不同。這是由于記憶性B細胞參與再次應(yīng)答所致。
免疫方法 ：
不同的免疫血清根據(jù)抗原的性質(zhì)不同而不同。
下面以制備家兔抗人IgG免疫血清為例作具體說明。
1. 用剪刀剪去家兔兩后腳掌的部分兔毛，以酒精及碘酒消毒皮膚。
2. 第一次免疫
用2 ml注射器吸取弗氏完全佐劑（FCA）乳化的抗原（人IgG）下稱FCA IgG液1 ml，每側(cè)腳掌皮下各注入0.5 ml。
3. 第二次免疫
間隔10-14 天后，于兩側(cè)窩及鼠蹊部腫大的淋巴結(jié)內(nèi)注入FCA-IgG，每個淋巴結(jié)注0.1 ml，其余注入淋巴結(jié)附近皮下共1 ml。如淋巴結(jié)未腫大或腫大不明顯時，直接注入兩側(cè)窩及鼠蹊部皮下。
4. 間隔7-10 天后，從耳靜脈采血0.5～1.0 ml，分離血清，以雙相瓊脂擴散試驗測定免疫血清的抗體效價（即試血）。效價至少應(yīng)達到1∶16以上時才能放血。
5. 若效價未達到要求，可用不加佐劑的抗原液（人IgG）耳靜脈內(nèi)注射免疫。即于1 周內(nèi)注射3 次，分別為0.1、0.3、0.5 ml。間隔1 周再試血。如效價達到要求應(yīng)立即放血。另外，也可在第2 次免疫后，以弗氏不完全佐劑（FIA）乳化的抗原（人IgG）（簡稱FIA-IgG）再免疫1-2 次。注射部位、劑量和間隔均同第2 次，再試血測抗體效價，如效價達到要求立即放血。
6. 放血分為心臟采用血法和頸動脈放血法，兩種選其一即可。
7. 分離血清：將三角燒瓶的血置37 ℃溫箱1 小時，再置4 ℃冰箱內(nèi)3～4 小時。待血液凝固血塊收縮后，用毛細滴管吸取血清。于3000 rpm離心15 分鐘，取上清加入防腐劑（0.01 ％硫柳汞或0.02 ％疊氮鈉，最終濃度），分裝后置4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/span>
實驗的注意事項：
1. 免疫用實驗動物不能使用妊娠動物。同時實驗動物的抗體反應(yīng)性個體差異性較大，因此免疫時至少應(yīng)選用兩只以上動物。
2. 免疫用的抗原必須經(jīng)FCA或FIA充分乳化后才能注射，否則將明顯影響抗原的免疫效果。
小鼠免疫需要的抗原量小，每次放血量不可以超過0.5ml。免疫血清屬于多克隆抗體，一般如果是用于FACS分析，多數(shù)ELISA或細胞毒實驗時，不需要純化。但是，對于需要知道精確抗體濃度時，來進行化學修飾標記熒光素或放射物時或制備抗體片斷時，要純化。
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