實驗操作中，IHC之石蠟包埋操作注意點及要點
發(fā)布時間:2018/10/22 17:09:11 閱讀次數(shù)：2018

常規(guī)的石蠟包埋過程包括五個基本步驟：即固定,脫水,透明,浸蠟和包埋,下面我們分步來介紹.

1 固定：取新鮮組織浸泡在4%多聚甲醛或10%福爾馬林溶液中固定24-48h.固定完后用自來水沖洗五次,各30min.

以下幾點建議請注意：

① 組織離體后應在30min之內(nèi)固定.

② 固定液容積應為組織的5~10倍,固定時間應依據(jù)組織大小而定,固定時間過長,修復后抗原暴露不完全；時間過短則會固定不充分.

③ 脫水機內(nèi)固定液一定要及時更換.

④ 固定過后應該水洗,否則容易造成脫片和染色不新鮮,同時也不利于蠟塊內(nèi)抗原基因的保存.

2 脫水：組織經(jīng)過50% 70% 85% 95%的梯度酒精各30min,無水乙醇兩次,每次30min完成脫水.

以下幾點建議請注意：

① 沒經(jīng)充分固定的組織不得進去脫水.固定脫水溫度注意不得超過37℃.

② 用于脫水的試劑容積應為組織總體積的5~10倍以上.

③ 由低向高濃度酒精脫水,級差越小越好,

④ 量大或條件允許,可將大小組織分開脫水,較大組織塊脫水時間比較小者.

⑤ 組織置于無水乙醇內(nèi)的時間不宜過長,以免硬化.

3 透明：分別經(jīng)過無水乙醇：二甲苯二甲苯（Ⅰ）（根據(jù)組織透明度,可減少或增加第二遍二甲苯透明的時間）二甲苯（Ⅱ）各30min.

以下幾點建議請注意：

① 二甲苯的容積應為組織總體積的5-10倍以上.

② 透明度時間適宜,依不同種類組織及其大小而異（子宮肌瘤食管等堅硬組織延長；肝臟,小組織縮短）組織呈現(xiàn)棕黃或暗紅色透明即可.

③ 二甲苯應及時過濾更換.

4 浸蠟：蠟Ⅰ,蠟Ⅱ各30分鐘.

注意點：石蠟溫度控制在58-62℃,高于熔點2℃為佳.

5 包埋：將金屬托放入熔化的石蠟,再放入組織,冷固待石蠟凝固.

以下幾點建議請注意：

① 防止各種異物組織包入蠟塊內(nèi).

② 包埋應先放石蠟后放組織,速度盡可能快,以免凝固.

③ 包埋用熔蠟應純凈,熔點與浸蠟的相近.

④ 包埋時不得使用明火,以防點燃,鑷子不可溫度過高,以免燙傷組織.

⑤ 包一個換一把鑷子,防止污染.

⑥ 囊壁管腔豎直包埋,所需切面向下包埋；扭曲組織正后包埋；多個小組織可以包在一個面.

IHC（Immunohistochemistry, 免疫組織化學）是用標記的特異性抗體（或抗原）對組織內(nèi)抗原（或抗體）的分布進行組織和細胞原位檢測的技術.IHC實驗中保護組織的兩種主要方法是對組織進行石蠟包埋和冰凍,其中石蠟包埋是制作組織標本最常用最基本的方法.

石蠟包埋對于組織形態(tài)保存完好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對照觀察；還能長期存檔,供回顧性研究.實驗組織保護的質(zhì)量是保證病理報告準確性的重要環(huán)節(jié).

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