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常規(guī)的石蠟包埋過(guò)程包括五個(gè)基本步驟:即固定,脫水,透明,浸蠟和包埋,下面我們分步來(lái)介紹.
1 固定:取新鮮組織浸泡在4%多聚甲醛或10%福爾馬林溶液中固定24-48h.固定完后用自來(lái)水沖洗五次,各30min.
以下幾點(diǎn)建議請(qǐng)注意:
① 組織離體后應(yīng)在30min之內(nèi)固定.
② 固定液容積應(yīng)為組織的5~10倍,固定時(shí)間應(yīng)依據(jù)組織大小而定,固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng),修復(fù)后抗原暴露不完全;時(shí)間過(guò)短則會(huì)固定不充分.
③ 脫水機(jī)內(nèi)固定液一定要及時(shí)更換.
④ 固定過(guò)后應(yīng)該水洗,否則容易造成脫片和染色不新鮮,同時(shí)也不利于蠟塊內(nèi)抗原 基因的保存.
2 脫水:組織經(jīng)過(guò)50% 70% 85% 95%的梯度酒精各30min,無(wú)水乙醇兩次,每次30min完成脫水.
以下幾點(diǎn)建議請(qǐng)注意:
① 沒(méi)經(jīng)充分固定的組織不得進(jìn)去脫水.固定 脫水溫度注意不得超過(guò)37℃.
② 用于脫水的試劑容積應(yīng)為組織總體積的5~10倍以上.
③ 由低向高濃度酒精脫水,級(jí)差越小越好,
④ 量大或條件允許,可將大小組織分開(kāi)脫水,較大組織塊脫水時(shí)間比較小者.
⑤ 組織置于無(wú)水乙醇內(nèi)的時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),以免硬化.
3 透明:分別經(jīng)過(guò)無(wú)水乙醇:二甲苯 二甲苯(Ⅰ)(根據(jù)組織透明度,可減少或增加第二遍二甲苯透明的時(shí)間) 二甲苯(Ⅱ)各30min.
以下幾點(diǎn)建議請(qǐng)注意:
① 二甲苯的容積應(yīng)為組織總體積的5-10倍以上.
② 透明度時(shí)間適宜,依不同種類(lèi)組織及其大小而異(子宮肌瘤 食管等堅(jiān)硬組織延長(zhǎng);肝臟,小組織縮短)組織呈現(xiàn)棕黃或暗紅色透明即可.
③ 二甲苯應(yīng)及時(shí)過(guò)濾 更換.
4 浸蠟:蠟Ⅰ,蠟Ⅱ各30分鐘.
注意點(diǎn):石蠟溫度控制在58-62℃,高于熔點(diǎn)2℃為佳.
5 包埋:將金屬托放入熔化的石蠟,再放入組織,冷固待石蠟?zāi)?
以下幾點(diǎn)建議請(qǐng)注意:
① 防止各種異物組織包入蠟塊內(nèi).
② 包埋應(yīng)先放石蠟后放組織,速度盡可能快,以免凝固.
③ 包埋用熔蠟應(yīng)純凈,熔點(diǎn)與浸蠟的相近.
④ 包埋時(shí)不得使用明火,以防點(diǎn)燃,鑷子不可溫度過(guò)高,以免燙傷組織.
⑤ 包一個(gè)換一把鑷子,防止污染.
⑥ 囊壁 管腔豎直包埋,所需切面向下包埋;扭曲組織正后包埋;多個(gè)小組織可以包在一個(gè)面.
IHC(Immunohistochemistry, 免疫組織化學(xué))是用標(biāo)記的特異性抗體(或抗原)對(duì)組織內(nèi)抗原(或抗體)的分布進(jìn)行組織和細(xì)胞原位檢測(cè)的技術(shù).IHC實(shí)驗(yàn)中保護(hù)組織的兩種主要方法是對(duì)組織進(jìn)行石蠟包埋和冰凍,其中石蠟包埋是制作組織標(biāo)本最常用 最基本的方法.
石蠟包埋對(duì)于組織形態(tài)保存完好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對(duì)照觀察;還能長(zhǎng)期存檔,供回顧性研究.實(shí)驗(yàn)組織保護(hù)的質(zhì)量是保證病理報(bào)告準(zhǔn)確性的重要環(huán)節(jié).
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