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快速導(dǎo)航
經(jīng)常聽到有實驗員說,這個細(xì)胞真是太難搞了!確實,對于很多科研工作者來說,細(xì)胞是最重要又非常寶貴的東西,承載著實驗?zāi)芊耥樌M(jìn)行下去及一些重要實驗數(shù)據(jù)的希望,但是在凍存復(fù)蘇的過程中,經(jīng)常會因為一些小細(xì)節(jié)導(dǎo)致大問題,下面也總結(jié)了四個小細(xì)節(jié):
第一, 嚴(yán)格控制好細(xì)胞的生長密度.
細(xì)胞的密度,就像我們住房環(huán)境一樣,大小會我們生活的質(zhì)量.但是他們又跟我們?nèi)祟惒灰粯?因為細(xì)胞的密度可以影響到他們能否生存下去,他們是一群不能擠又不能孤獨的嬌貴寶寶.細(xì)胞密度過高,會讓他們沒有足夠的生存空間;細(xì)胞密度過低,會讓他們無法互相連接健康的生長.所以,建議大家在細(xì)胞接種前,一定要調(diào)整好適合細(xì)胞生長的濃度,從而提高細(xì)胞的存活率.
第二, 嚴(yán)格控制溫度.
慢凍速融是細(xì)胞凍存復(fù)蘇的核心關(guān)鍵詞之一.常規(guī)的凍存操作中,常見的是-4℃→-20℃至-40℃→-80℃→液氮,一定要避免溫度原因?qū)е录?xì)胞的滅亡.除非使用了成分經(jīng)過優(yōu)化,經(jīng)過嚴(yán)格測試的凍存液,才能免去程序降溫這個繁瑣的步驟.保存的時候也要保證整個細(xì)胞都是處于液氮的液面下方,避免溫度對細(xì)胞存存活的影響.
第三, 嚴(yán)格控制無菌環(huán)境.
天生嬌貴的細(xì)胞寶寶,如果需要折騰它,一定要在無菌超凈的環(huán)境下才行.超凈工作臺,所有的儀器用品一定要提前滅菌,培養(yǎng)箱等也要定期的用酒精擦干.微生物對細(xì)胞的影響經(jīng)常是最開始的時候沒發(fā)現(xiàn),等發(fā)現(xiàn)的時候已經(jīng)結(jié)束了,所以一定要小心.
第四, 配制細(xì)胞凍存液.
除了操作中的一些小細(xì)節(jié),還有一個重點就是配制細(xì)胞凍存液.常見的凍存液配制要遵循培養(yǎng)基+血清+DMSO的成分要求.這里面的血清尤其重要,一定要選擇適宜的血清,如果血清不合適,細(xì)胞就會生長的特別慢,甚至死亡.配制時也要根據(jù)細(xì)胞的實際判斷成分配比,且建議使用程控儀,注意配制溫度,否則就又會影響細(xì)胞的存活效果.
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